Ⅰ 求助 细胞复苏后不活怎么回事
细胞复苏后不活怎么回事
齐氏生物认为复苏细胞是否贴壁跟你冻存时的操作有直接关系。而且细胞的传代数越多，即细胞越老，越禁不起低温的折腾。复苏后，细胞有个休眠期，大约7-14天不等。只要不死，你就慢慢养着。突破了某个时间点，你会发现细胞又神奇的康复了。但要等到细胞状态良好，传2代以上再做实验。尤其是流式、RNA干扰之类的。
细胞不好贴壁，细胞生物学专家CHI scientific 建议您尝试以下6点：
复苏后洗涤一下,毕竟DMSO影响细胞的生长。
最好用塑料瓶培养,如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾胶原包被一下培养瓶,或者用盐酸对培养瓶进行蚀刻,效果应该还可以，或者涂 fibronectin/collagen /BSA，也可以帮助细胞贴附
还有就是你的冻存的细胞是否是完全死了,如果是的话是不可能贴壁的,因此在复苏后我建议你用台盼兰染色看一下死细胞和活细胞的数目及比例.
4.换液时间延长，尽量不要用力摇动。
5.尽量缩短复苏时间
6.操作的环境温度最好不要变动太多。
Ⅱ 细胞摇瓶培养时用不用换液，如何换液
细胞培养每天换液不好,悬浮细胞长到达培养基中的营养成份用的差不多时,半量换液,贴壁细胞长到达70%时传代,各种细胞生长速度不一,所以换液时间要根据具体情况而定.
Ⅲ 细胞培养几天换液
取决于细胞类型或者说生长/新陈代谢的速度，一般哺乳动物细胞在2-4天换液的比较常见
Ⅳ 96孔培养板上接种的细胞很均匀，但换液时，结果在显微镜下观察周边细胞全被冲到孔中央去了
博凌科为解答：我们实验室一般用机械吸引器吸引，吸引器管前面套一个20ul加样器的Tip头，效果不错，操作在无菌台内进行。Tip头剪去尖端后灭菌使用，加液 时液体呈滴状滴入，就不会扰动孔底的细胞了。3T3-L1前脂肪细胞不是贴壁的吗？怎么会这么容易被冲到中间去？我只听说过第一次把细胞加到孔中的时候很容易让细胞长得不均匀，3T3-L1前脂肪细胞要是贴壁了不容易被冲走了吧，要不然就不要用胰酶消化了，呵 呵！！建议：加液的时候沿着边轻轻的加入，动作柔和，可以避免冲动细胞；去液的时候直接甩板，方便快捷。去液的时候不建议直接甩板，容易污染。可以剪掉tip尖，不能直接冲细胞，沿孔壁轻轻加入，液体提前在孵箱里预热10分钟，有时候液体凉也会使细胞 掉下来。是换完液马上就卷了，还是过一会儿才卷的？我觉得这个细胞状态不好的时候是容易卷的，我诱导后换维持培养液时细胞卷的很厉害，原来也以为是换液造成 的，后来观察了一下不是。你在仔细分析一下，一定是换液造成的马？一般帖壁细胞换液时即使是冲也只是一小部分破掉，不会大面积掉下来的，我认为。换完液马上就卷了，细胞好象是一大片全掉下来拉，并在浮动，然后我第二天在看时就发现细胞全堆在中间，我也没在意，继续换液.但现在是我把细胞从培 养箱里拿出来肉眼就能看到每个孔中间有一个小白点.我以为是污染了，拿到显微镜下看又不太像，自己感觉是细胞叠在一起长的太密了.因为能看到很致密的细胞 团.而周围的细胞轮廓很清晰，但不是很多.为这个实验我已经铺了5块96孔板了，真不想再这样继续盲目下去.我在96孔板中诱导细胞换液一般采用半量换液，这样细胞就不会被冲走了，至于换液的间隔与细胞有关，我诱导肝细胞是隔天半量换液。如果卷得特别厉 害，很可能是细胞的问题，建议更新细胞株。