Ⅰ 求助 細胞復甦後不活怎麼回事
細胞復甦後不活怎麼回事
齊氏生物認為復甦細胞是否貼壁跟你凍存時的操作有直接關系。而且細胞的傳代數越多，即細胞越老，越禁不起低溫的折騰。復甦後，細胞有個休眠期，大約7-14天不等。只要不死，你就慢慢養著。突破了某個時間點，你會發現細胞又神奇的康復了。但要等到細胞狀態良好，傳2代以上再做實驗。尤其是流式、RNA干擾之類的。
細胞不好貼壁，細胞生物學專家CHI scientific 建議您嘗試以下6點：
復甦後洗滌一下,畢竟DMSO影響細胞的生長。
最好用塑料瓶培養,如果是玻璃瓶,那麼可以用鼠尾膠原包被一下培養瓶,或者用鹽酸對培養瓶進行蝕刻,效果應該還可以，或者塗 fibronectin/collagen /BSA，也可以幫助細胞貼附
還有就是你的凍存的細胞是否是完全死了,如果是的話是不可能貼壁的,因此在復甦後我建議你用台盼蘭染色看一下死細胞和活細胞的數目及比例.
4.換液時間延長，盡量不要用力搖動。
5.盡量縮短復甦時間
6.操作的環境溫度最好不要變動太多。
Ⅱ 細胞搖瓶培養時用不用換液，如何換液
細胞培養每天換液不好,懸浮細胞長到達培養基中的營養成份用的差不多時,半量換液,貼壁細胞長到達70%時傳代,各種細胞生長速度不一,所以換液時間要根據具體情況而定.
Ⅲ 細胞培養幾天換液
取決於細胞類型或者說生長/新陳代謝的速度，一般哺乳動物細胞在2-4天換液的比較常見
Ⅳ 96孔培養板上接種的細胞很均勻，但換液時，結果在顯微鏡下觀察周邊細胞全被沖到孔中央去了
博凌科為解答：我們實驗室一般用機械吸引器吸引，吸引器管前面套一個20ul加樣器的Tip頭，效果不錯，操作在無菌台內進行。Tip頭剪去尖端後滅菌使用，加液 時液體呈滴狀滴入，就不會擾動孔底的細胞了。3T3-L1前脂肪細胞不是貼壁的嗎？怎麼會這么容易被沖到中間去？我只聽說過第一次把細胞加到孔中的時候很容易讓細胞長得不均勻，3T3-L1前脂肪細胞要是貼壁了不容易被沖走了吧，要不然就不要用胰酶消化了，呵 呵！！建議：加液的時候沿著邊輕輕的加入，動作柔和，可以避免沖動細胞；去液的時候直接甩板，方便快捷。去液的時候不建議直接甩板，容易污染。可以剪掉tip尖，不能直接沖細胞，沿孔壁輕輕加入，液體提前在孵箱里預熱10分鍾，有時候液體涼也會使細胞 掉下來。是換完液馬上就卷了，還是過一會兒才卷的？我覺得這個細胞狀態不好的時候是容易卷的，我誘導後換維持培養液時細胞卷的很厲害，原來也以為是換液造成 的，後來觀察了一下不是。你在仔細分析一下，一定是換液造成的馬？一般帖壁細胞換液時即使是沖也只是一小部分破掉，不會大面積掉下來的，我認為。換完液馬上就卷了，細胞好象是一大片全掉下來拉，並在浮動，然後我第二天在看時就發現細胞全堆在中間，我也沒在意，繼續換液.但現在是我把細胞從培 養箱里拿出來肉眼就能看到每個孔中間有一個小白點.我以為是污染了，拿到顯微鏡下看又不太像，自己感覺是細胞疊在一起長的太密了.因為能看到很緻密的細胞 團.而周圍的細胞輪廓很清晰，但不是很多.為這個實驗我已經鋪了5塊96孔板了，真不想再這樣繼續盲目下去.我在96孔板中誘導細胞換液一般採用半量換液，這樣細胞就不會被沖走了，至於換液的間隔與細胞有關，我誘導肝細胞是隔天半量換液。如果卷得特別厲 害，很可能是細胞的問題，建議更新細胞株。